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ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程
日期：2025-05-10 16:47
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摘要：
這種形式需要使用特定于該抗原不同表位的兩種不同抗體。這兩種抗體通常被稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被于多孔板表面上并用作捕獲抗體以促進抗原的固定，另一種抗體被酶偶聯(lián)并促進抗原的檢測。ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程：
1、包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。向每個Elisa板孔中加入0.1mL，4℃過夜孵育。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2、封閉：分別向各板孔中加入0.1mL的封閉液，37℃孵育1h，洗滌
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這種形式需要使用特定于該抗原不同表位的兩種不同抗體。這兩種抗體通常被稱為匹配抗體對。其中一種抗體包被于多孔板表面上并用作捕獲抗體以促進抗原的固定，另一種抗體被酶偶聯(lián)并促進抗原的檢測。ELISA試劑盒檢測未知抗原的雙抗體夾心法過程：
1、包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。向每個Elisa板孔中加入0.1mL，4℃過夜孵育。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
2、封閉：分別向各板孔中加入0.1mL的封閉液，37℃孵育1h，洗滌
3、加樣：分別加用稀釋液稀釋一定倍數(shù)的待檢樣品0.1mL和梯度稀釋后的抗原標準品0.1mL于上述已包被好的反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時，洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
4、加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中，加入0.1mL新鮮稀釋的酶標抗體(酶標抗體的稀釋倍數(shù)需提前優(yōu)化測定)。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
5、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入0.1mL新鮮配制的TMB底物溶液，37℃避光反應(yīng)10～30min。
6、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入50uL的2M硫酸。
7、結(jié)果判定：將Elisa板置于酶標儀上，于450nm處讀取各空的OD值，各孔分別減去空白對照孔的OD值進行調(diào)零，根據(jù)標準樣品制作標準曲線，再分別計算各樣品的抗原含量。